細胞總數計算需要使用血球計數器（hemocytometer），它包括一塊有刻度的特製玻璃片和一塊蓋玻片。

進行細胞總數計算時，先將樣本加到血球計數器的樣本室，然後在顯微鏡下數出細胞數目，最後計算得出樣本細胞密度。

細胞總數計算練習

圖中顯示了把樣本加到血球計數器的樣本室後，在顯微鏡下可看到影像。那麼如何數算細胞的數目呢？

樣本室中的細胞

一般數出 4 個角上（圖中紅色框所示）的細胞數目，而邊線上的細胞，則採取“數上不數下，數左不數右”的原則，即把貼於上邊線和左邊線的細胞計算在內，而下邊線和右邊線的則無需數算。

步驟

1. 四個角上的細胞數目分別為： 18，24，25，21；
2. 四個角上細胞平均數目為： （18 + 24 + 25 + 21）/4 = 22 ；
3. 樣本的體積為 1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 0.1 mm³，因此細胞密度為： 22 個 /0.1 mm³ = 220 000 個/ml 。

使用血球計數器進行細胞總數計算，所得結果是活細胞和已死細胞的總數。如果只需估算活細胞數目，可把樣本在營養瓊脂板上進行培養，再根據營養瓊脂平板上形成的菌落數目，計算出樣本中的活細胞數量。

營養瓊脂板上的菌落數必須適中（30 — 300 個），否則無法清楚的計數。要取得合適的菌落數，通常需要將樣本稀釋。

稀釋樣本的方法：用已滅菌的培養液連續稀釋。

1. 抽取 1 份（如 1 ml）樣本，加入 9 份（如 9 ml）已滅菌培養液中，充分混合，標記為 10¹，即稀釋了 10 倍；
2. 抽取 1 份標記了 10¹ 的樣本，加入 9 份已滅菌的培養液中，充分混合，標記為 10²，即稀釋了 10² 倍；
3. 重複步驟 2 ，用已滅菌的培養液，稀釋上一步得到的樣本，並做好標記，即可依次得到稀釋了 10³，10⁴，10⁵，10⁶ 倍的樣本。

如何根據菌落數目計算活細胞密度呢？
假如稀釋了 10⁵ 倍的樣本 0.1 ml ，在營養瓊脂板上形成 134 個菌落，那麼原始樣本的活細胞密度為： 134 × 10⁵ ÷ 0.1 個/ml 即 1.34 × 10⁸ 個/ml。