第二節 DNA 指紋分析的方法
限制性片段長度多態性分析(RFLP)

限制性片段長度多態性分析(RFLP, Restriction Fragment Length Polymorphism)是一種基於 VNTR 的 DNA 指紋分析的方法。

RFLP 的步驟:

  1. 提取樣本中的 DNA。
  2. 用特定限制酶切割 DNA。特定限制酶的識別部位部分位於旁側序列中,而個體的 VNTR 長度不同,使得限制性片段的長度也因人而異。
  3. 進行凝膠電泳,按長度分離 DNA 片段。
  4. 利用鹼性溶液使 DNA 變性,成為 DNA 單鏈。
  5. 把 DNA 單鏈片段轉移到尼龍濾膜表面,便於與 DNA 探針結合。
  6. 把濾膜浸泡到含有放射性 DNA 探針的溶液中。 DNA 探針的鹼基序列與四至五個 VNTR 位點上的部分序列互補,而相互結合。
  7. 洗去沒有與 DNA 單鏈結合的探針,把濾膜放在照相底片上顯影。
  8. 放射性探針使照相底片相應位置曝光,顯影後產生暗條帶,這塊帶有暗條帶的膠片就是 DNA 指紋。

利用 RFLP 分析 \(4-5\) 個 VNTR 位點,需要使用大量高純度的 DNA 樣本,而且整個過程需要幾個月才能完成。
關於 RFLP 還可觀看動畫 DNA 指紋分析的程序

限制性片段長度多態性分析
聚合酶鏈反應短銜接重複分析(PCR - STR)

聚合酶鏈反應短銜接重複分析(PCR - STR, Polymerase Chain Reaction - Short Tandem Repeat analysis)是現今使用的 DNA 指紋分析技術。

PCR - STR 的步驟:

  1. 提取樣本中的 DNA。
  2. 利用 PCR 擴增基因中的 STR。
  3. 進行凝膠電泳,把擴增的 DNA 片段按長度分離,所得的 DNA 帶即為 DNA 指紋。
現今使用的 DNA 指紋技術: PCR - STR
兩種 DNA 指紋分析技術( PCR - STR 和 RFLP )的比較
PCR - STR RFLP
原理 基於個體間 STR 的差別 基於個體間 VNTR 的差別
所需樣本 少量 DNA 樣本 大量高純度 DNA 樣本
主要步驟 PCR、凝膠電泳 限制酶切割 DNA、凝膠電泳、DNA 片段變性、放射性 DNA 探針雜交、顯影等
所需時間 數小時 幾個月
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